B族鏈球菌(GBS)熒光PCR核酸擴增檢測試劑盒說明書

【產品名稱】

通用名稱：B 族鏈球菌 (GBS)核酸擴增檢測試劑盒(PCR 熒光探針法)

Name ：Diagnostic Kit for Group B streptococcus DNA （PCR Fluorescence Probing）

【包裝規(guī)格】48T/盒

【預期用途】

本試劑盒適用于檢測全血等樣本中的 B 族鏈球菌，用于 B 族鏈球菌感染的輔助診斷，其檢測結果僅供參考。

【檢驗原理】

本試劑盒用一對 B 族鏈球菌特異性引物，結合一條特異性探針，用熒光 PCR技術對 B 族鏈球菌的核酸進行體外擴增檢測，用于臨床上對可疑感染者的病原學診斷。

說明：不同批號的試劑盒組分不可交互使用。

2. 試劑配制（試劑準備區(qū)）

根據(jù)待檢測樣本總數(shù)，設所需要的 PCR 反應管管數(shù)為 N(N=樣本數(shù)+1 管陰性

對照+1 管陽性對照；樣品每滿 7 份，多配制 1 份)，每測試反應體系配制如下表：

試劑 GBS 反應液 酶液

用量（樣本數(shù)為 N） 20μl 1μl

3. 加樣（樣本處理區(qū)）

將步驟 1 提取的 DNA、陽性質控品、陰性質控品各取 4μl，分別加入相應的反

應管中，蓋好管蓋，混勻，短暫離心。

【儲存條件和有效期】

試劑盒保存于-20±5℃，有效期 12 個月；避免反復凍融，凍融次數(shù)不超過 5 次；試劑開瓶后，在室溫條件下放置時間不應超過 8 小時；運輸采用干冰（或者冰袋）保持低溫，運輸時間不應超過 4 天。試劑盒生產日期見產品標簽。

【標本要求】

標本采集：用注射器取血 5mL 至 EDTA-2Na 抗凝管

保存運輸：上述標本短期內可保存于-20℃，長期保存可置-70℃，但不能超過6個月，標本運送應采用 2~8℃冰袋運輸，嚴禁反復凍融。

【使用方法】

1. 樣品處理（樣本處理區(qū)）

1.1樣本前處理

取抗凝血下層血細胞 50uL，加入 100uL 雙蒸水吹勻

1.2DNA 提取

1) 對上述處理好的標本加入等體積核酸提取液（固體標本加入50uL核酸提取液），100℃恒溫處理 10 分鐘，13,000 rpm 離心 5 分鐘，取上清液轉移至新的 1.5mlEP 管，-20℃保存；

2) DNA 的提取也可以采用上海晅科生物科技有限公司生產的 DNA 提取試劑盒（離心柱提取法），請嚴格按照試劑盒說明書進行操作。

設置 Baseline 和 Threshold：一般直接按機器自動分析的結果分析，當曲線出

現(xiàn)整體傾斜時，根據(jù)分析后圖像調節(jié) Baseline 的 start 值(一般可在 3~15 范圍

內調節(jié))、stop 值(一般可在 5~20 范圍內調節(jié))，以及 Threshold 的 Value 值(上

下拖動閾值線至高于陰性對照)，重新分析結果。

5.2結果判斷

陽性：檢測通道 Ct 值≤35.0，且曲線有明顯的指數(shù)增長曲線；

可疑：檢測通道 35.0<Ct 值≤37，建議重復檢測，如果檢測通道仍為 35.0<Ct

值≤37，且曲線有明顯的增長曲線，判定為陽性，否則為陰性；

陰性：樣本檢測結果 Ct 值>37 或無 Ct 值。

6. 檢測方法的局限性

1）樣本檢測結果與樣本收集、處理、運送以及保存質量有關；

2）樣本提取過程中沒有控制好交叉污染，會出現(xiàn)假陽性結果；

3）陽性對照、擴增產物泄漏，會導致假陽性結果；

4）病原體在流行過程中基因突變、重組，會導致假陰性結果；

5）不同的提取方法存在提取效率差異，會導致假陰性結果；

6）試劑運輸，保存不當或試劑配制不準確引起的試劑檢測效能下降，出現(xiàn)假陰性或定量檢測不準確的結果；

7）本檢測結果僅供參考，如須確診請結合臨床癥狀以及其他檢測手段。

7. 質控標準

陰性質控品：無明顯擴增曲線或無 Ct 值顯示；

陽性質控品：擴增曲線有明顯指數(shù)生長期，且 Ct 值≤32；

以上條件應同時滿足，否則實驗視為無效。

8. 產品性能指標

陰陽性參考品符合率：8 份陽性參考品符合率為 100％；10 份陰性參考品符合

率為 100％。

低檢測限：2.0×102copies/ml。

精密度：批內、批間精密度檢測 Ct 值的變異系數(shù)（CV）均≤3%。

【注意事項】

1.所有操作嚴格按照說明書進行；

2.試劑盒內各種組分使用前應自然融化，*混勻并短暫離心；

3.反應液應避光保存；

4.反應中盡量避免氣泡存在，管蓋需蓋緊；

5.使用一次性吸頭、一次性手套和各區(qū)工作服；

6.樣本處理、試劑配制、加樣需在不同區(qū)進行，以免交叉污染；

7.實驗完畢后用 10%次氯酸或 75%酒精或紫外燈處理工作臺和移液器；

8.試劑盒里所有物品應視為污染物對待，并按照《微生物生物醫(yī)學實驗室生物安全通則》進行處理。

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