禽腦脊髓炎抗體elisa檢測試劑盒使用說明書

【用途】

用來檢測雞血清中的禽腦脊髓炎病毒(AEV)抗體

【試驗原理】

禽腦脊髓炎，也稱雛雞傳染性顫搐病，主要通過雞蛋傳播，感染雞和易感雞或成年禽之間亦可發(fā)生水平傳播。青年雞（1~4周齡）主要臨床表現(xiàn)為共濟失調(diào)、麻痹或頭頸快速震顫等癥狀，成年雞表現(xiàn)為產(chǎn)蛋能力下降。血清中的病毒抗體可通過酶聯(lián)免疫的方法檢測。血清中的AEV抗體水平及整個雞群的免疫狀況可用ELISA方法進行監(jiān)測。

將滅活的AEV抗原包被在微孔板上，加入稀釋后的血清并孵育，血清中的抗AEV抗體將與包被在微孔板上的AEV結(jié)合，形成AEV抗原-抗體復(fù)合物。然后洗掉未結(jié)合的物質(zhì)，加堿性磷酸酶標(biāo)記的抗雞IgG的酶標(biāo)結(jié)合物至微孔板中，酶標(biāo)物將與AEV抗原-抗體復(fù)合物結(jié)合。孵育后洗掉未結(jié)合的結(jié)合物，然后加入底物溶液。底物與堿性磷酸酶反應(yīng)并生成一種有顏色的產(chǎn)物，后終止反應(yīng)，將顏色固定。顏色的深淺可用酶標(biāo)儀（405-410nm）測定。

【主要組成成份】

【儲存條件及有效期】

1.     2~8℃避光保存，防止冷凍，有效期為12個月。

2.     包被板開封后2~8℃避光保存，使用期限為15天。

【適用儀器】

含450nm和630nm波長酶標(biāo)儀；37℃恒溫設(shè)備；可調(diào)微量移液器。

【樣本要求】

1.     為取得Z佳實驗效果，避免使用含疊氮鈉、高血脂、長菌以及嚴(yán)重溶血的樣品；

2.     短期（7天）將進行檢測的血清樣品可存放于2～8℃；如需長期保存，應(yīng)置于-20℃或以下，避免反復(fù)凍融。

【檢驗方法】

1.      洗滌液配制：用蒸餾水或去離子水將濃縮洗滌液（2號液）按1：10稀釋（如取50ml濃縮液與450ml蒸餾水或去離子水），充分混勻即為工作洗滌液。

2.      樣本稀釋：用樣本稀釋液（5號液）將待檢血清按1:100稀釋（如5μl血清＋495μl樣本稀釋液），充分混勻。 陰性、陽性對照品不用稀釋，直接加樣。

3.      加樣反應(yīng)：每次試驗設(shè)陰性對照2孔、陽性及空白對照各1孔（分別加入陰性、陽性對照及樣本稀釋液100μl）。樣本檢測孔每孔加已稀釋血清樣本100μl。37℃避光反應(yīng)30分鐘。甩去孔內(nèi)液體，每孔注滿工作濃度洗滌液洗滌3次，每次均需停留1分鐘；后一次甩凈，拍干。

4.       加酶反應(yīng)：除空白對照孔外，其余每孔加酶結(jié)合物（1號液）1滴，37℃避光反應(yīng)30分鐘。甩去孔內(nèi)液體，如上洗滌，拍干。

5.        顯色反應(yīng)：加底物（3號液）和顯色劑（4號液）各1滴，混勻，37℃下避光顯色10分鐘。

6.        終止反應(yīng)： 加終止液（6號液）1滴，以空白對照調(diào)零，用酶標(biāo)儀于450nm波長（630nm作為參比波長）讀取OD值。

【參考值】

1.     Cut-off 值 (COV)=陰性對照平均OD值×2.1 (陰性對照孔OD值＜0.08時按0.08計)。

2.     有效性判定：

空白對照孔OD值＜0.05（若大于0.05則實驗無效）；

陰性對照孔OD值≤0.10（若大于0.10則實驗無效）；

陽性對照孔OD值≥0.30（若小于0.30則實驗無效）。

【檢驗結(jié)果的解釋】

樣本OD值≥COV值時，判為禽流感病毒抗體陽性；

樣本OD值＜COV值時，判為禽流感病毒抗體陰性。                        

【檢驗方法的局限性】本試劑僅適用于檢測鴨血清。

【注意事項】

1.     包被板須密封防潮。從冷藏環(huán)境中取出時，應(yīng)平衡至室溫后，方可開封啟用。未使用完的板條應(yīng)即時放回有干燥劑的自封袋中，4℃密封保存。

2.     滴加試劑前應(yīng)將滴瓶輕搖、混勻，首滴棄去；滴加試劑時瓶身應(yīng)保持豎直。

3.     瓶蓋每次使用后要蓋緊，各瓶蓋之間不可混用。不同批號試劑盒的試劑組份不可混用。

4.     孵育時，推薦使用水浴箱。如無水浴箱，可取密封濕盒放入37℃溫箱內(nèi)使用。

5.     用棄的試劑盒及樣本都應(yīng)按污染物妥善處理。試劑盒內(nèi)終止液有腐蝕性，須小心使用。

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